Comment fait-on un OGM via Electroporation ?

 

par semix |

     

Ceci est un autre principe pour faire un OGM. Le but principal est de faire entrer un fragment d’ADN étranger dans un organisme. Il est couramment utilisé, car le matériel exigé est moins couteux. Ce principe est sollicité dans les laboratoires qui utilisent les « champignons » comme modèle d’étude. Le principe est de voir si l’ADN arrive à s’intégrer correctement dans la cellule hôte.

Quelles sont les fournitures nécessaires ?

  • Une cellule
  • Un fragment d’ADN
  • Un bac
  • Une pile
  • Deux électrodes

Étapes de réalisation

1.

Isolez les cellules qui vous serviront d’hôte par culture cellulaire. Dans le même temps, extraire un morceau d’ADN que vous souhaitez transmettre à vos cellules. Si ce sont des champignons, il faut enlever leur paroi à l’aide de chitinase (molécule qui rompt les parois fongiques).

2.

Remplissez votre bac d’eau et plongez à l’intérieur vos deux électrodes. Branchez deux fils électriques à une pile, que vous placez à l’extérieur du bac. Les fils seront également branchés aux électrodes, ce qui permettra de les alimenter grâce à la pile.

3.

Plongez dans le bac vos cellules hôtes isolées ainsi que le fragment d’ADN que vous souhaitez introduire dans les cellules. Une grande quantité d’ADN et de cellule doivent être mis dans le bac, afin d’augmenter la probabilité de rencontre de ces deux éléments pour l’étape suivante.

4.

Appliquez un courant. Celui-ci va créer des petits trous dans la membrane plasmique de la cellule, qui permettra de faire pénétrer l’ADN étranger à l’intérieur. Laissez le courant s’appliquer quelques minutes.

5.

Débranchez la pile et retirer les électrodes, afin que la membrane plasmique de la cellule puisse se refermer et ainsi « piéger » l’ADN à l’intérieur. La cellule va incorporer cet ADN dans son génome. A ce moment-là, retirez les cellules de votre bac.

6.

Récupérez uniquement les cellules encore en vie. Vous obtenez des cellules génétiquement modifiées. Placez-les en culture cellulaire avant de les injecter dans un organisme entier (en général dans une plante), pour que cela devienne un OGM.

Astuces et mises en garde

Astuce(s) :

Une des méthodes les plus fiables pour faire un OGM.

Mise(s) en garde :

Ne pas laissez trop longtemps le courant électrique, car cela risquerait de tuer toutes les cellules, au lieu de simplement les percer.

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