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Comment utiliser une cellule de Malassez ?

par semix |

Une cellule de Malassez a pour principal objectif le dénombrement cellulaire. Elle permet ainsi une numération afin de savoir combien de cellules contient notre milieu. Ce principe est basé sur une méthode statistique. C'est-à-dire que l’on travaille avec un échantillon pour déterminer l’affluence de la population.

Étapes de réalisation

Fournitures

Une cellule de Malassez
Du bleu de Trypan
Un tube eppendorf
Un microscope photonique

Procurez-vous une cellule de Malassez. Elle est en vente dans les commerces spécialisés. Utilisez préférentiellement celle de 1 microlitre.

Récupérez le milieu que vous souhaitez dénombrer. Agitez-le afin de créer une suspension cellulaire. Prélevez 100 microlitres de votre liquide et introduisez-le dans un tube eppendorf. Cette manipulation doit s’exécuter en condition stérile.

Homogénéisez votre suspension cellulaire qui se trouve dans le tube eppendorf. Ajoutez 10 microlitres d’une solution de bleu de Trypan. Elle permet de mettre en évidence les cellules mortes en leur donnant une coloration bleue. Mélangez votre solution.

Prenez votre cellule de Malassez, retirez la lamelle qui se trouve sur la partie supérieure. Déposez environ 15 microlitres sur la cellule de Malassez, puis reposez la lamelle sur le dessus, afin de faciliter l’observation au microscope. Attention votre dépôt ne doit pas déborder de votre cellule. Celle-ci comporte une rigole, dans laquelle vous devez réaliser votre dépôt.

Laissez les cellules sédimenter environ 5 minutes. Placez votre cellule de Malassez sous un microscope photonique. Observez les cellules avec l’objectif 40. La cellule est quadrillée, cherchez le grand carré qui est subdivisé de 100 petits carreaux (formé de 10 lignes et 10 colonnes).

Dénombrez les cellules qui se trouvent dans le grand carré. Comptez uniquement celles qui sont blanches, car les cellules bleues sont mortes et donc à ne pas prendre en compte. Les 100 carreaux représentent un volume de 1 microlitre. Vous obtenez de cette manière la concentration de cellule de votre mélange. Ainsi, grâce à un produit en croix, vous pouvez choisir avec combien de cellules vous souhaitez travailler, en prélevant le volume adéquat.

Astuces et mises en garde

Facile et rapide à utiliser.

Permet d’avoir une approximation de cellules qui se trouvent dans votre solution de départ.

Méthode statistique qui n’est pas très précise contrairement aux méthodes plus récentes, mais plus coûteuses, comme la méthode de fluoro-opto électronique.

Commentaires

blopblop | 17/04/2013

"Prenez votre cellule de Malassez, retirez la lamelle qui se trouve sur la partie supérieure. Déposez environ 15 microlitres sur la cellule de Malassez, puis reposez la lamelle sur le dessus, afin de faciliter l’observation au microscope. Attention votre dépôt ne doit pas déborder de votre cellule. Celle-ci comporte une rigole, dans laquelle vous devez réaliser votre dépôt. " Ceci n'est pas la technique habituelle, la lamelle doit d'abords être collée avec une très petite quantité d'eau sur les bords ( attention pas au centre sur le quadrillage). Puis l'échantillon à analyser doit être déposer entre la cellule de Malassez et la lamelle de manière régulière pour avoir une répartition homogène des cellules. De plus il faudra tenir compte de la dilution due au bleu de trypan.

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