Comment observer une phagocytose ?

 

par semix |

     

La phagocytose est un processus de notre système immunitaire, le plus souvent réalisé par des macrophages. Leur rôle est de « manger » et digérer les hôtes pathogènes de notre organisme. Le plus souvent, ce système de défense s’attaque aux bactéries. Afin d’observer ce phénomène, il est plus facile de travailler avec des levures, mais une petite préparation s’impose auparavant.

Quelles sont les fournitures nécessaires ?

  • Des levures
  • Des macrophages
  • Des boîtes de 35millimètres
  • Du tampon Hepes
  • Un incubateur
  • Un milieu de culture
  • De l’alcool
  • Un microscope électronique à balayage

Étapes de réalisation

1.

Ensemencez vos macrophages dans une boite de culture de 35 millimètres. Placez une lame au fond de la boite, afin que vos cellules se déposent dessus. Le dépôt sur la lame sera l’objet à observer. Pour que votre préparation soit agréable à regarder, déposez entre 150 000 et 300 000 cellules par boites. Réalisez cette manipulation dans un milieu stérile, pour que votre culture soit pure. Le volume doit être de 2 millilitres.

2.

Versez du tampon Hepes dans vos boîtes. Récupérez vos levures et agitez cette solution, afin de les mettre en suspension dans le milieu. Déposez 200 microlitres de cette solution dans votre milieu contenant les macrophages. Placez le tout dans un incubateur à 37°C.

3.

Laissez incuber entre 1 à 40 minutes. Cela dépend du stade de la phagocytose que vous souhaitez observer. Plus le temps est court, plus le stade sera précoce. Le mieux, si vous le pouvez, est de faire plusieurs boites et ainsi regarder le phénomène évoluer en repérant les différents stades.

4.

Une fois le temps écoulé, retirez vos boites et procédez à un rinçage à l’aide de votre milieu de culture.

5.

Récupérez boîte après boite. Retirez la lame qui se trouve au fond, puis déposez-la sur du papier parafilm. Trempez-la successivement dans des bains d’alcool de concentration croissante (50°,75°,90°et 100°). Cette opération permet de déshydrater votre échantillon.

6.

Faites sécher votre préparation. Appliquez de la colle d’argent sur la partie de la lame qui ne contient pas de cellule, puis placez-la sur un porte objet. Étalez bien la colle, le montage doit être solide.

7.

Métallisez la lame dans un centre d’observation de micro-structure. Observez sous un microscope électronique à balayage. Régalez-vous, les images sont sublimes.

Astuces et mises en garde

Mise(s) en garde :

Peu de centres de recherches possèdent un microscope électronique à balayage.

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