Comment dénombrer les bactéries présentes dans un échantillon ?

 

par juju27 |

     

Dénombrer les bactéries présentes dans un échantillon est une chose qui peut s'avérer indispensable dans certains cas, en particulier pour des raisons évidentes d'hygiène. Cela permet de vérifier la pathogénicité d'un échantillon et de savoir si un échantillon est consommable, ou si un traitement a agi ou non.
Voici comment dénombrer les bactéries se trouvant dans un échantillon...

Quelles sont les fournitures nécessaires ?

  • un bec Bensen
  • une solution bactérienne
  • des boîtes de Pétri
  • du milieu de culture
  • des billes de verre stériles
  • une pipette automatique
  • des cônes stériles
  • un vortex

Étapes de réalisation

1.

Réaliser une dilution en cascade de l'échantillon dont vous souhaitez dénombrer les bactéries, en ayant pris soin de réfléchir aux concentrations qui vous intéressent.
En effet, inutile de diluer les échantillons jusqu'à 10^-8 si l'échantillon est faiblement concentré en bactéries dès le départ.
Cette étape doit être réalisée en conditions stériles.

2.

Préparez des boîtes de Pétri, préalablement remplies du milieu de culture permettant de mettre en évidence les bactéries qui vous intéressent.
Si vous souhaitez dénombrer l'intégralité des bactéries, utilisez un milieu de type GN.
Par contre, si vous souhaitez mettre en évidence uniquement des bactéries Gram +, il vous faudra choisir un milieu spécifique.

3.

Annotez le fond des boîtes de Pétri, en indiquant la concentration que vous comptez y déposer.
Prévoyez de réaliser 3 boîtes par dilution.

4.

Munissez-vous du tube de l'une des dilutions (par exemple, la dilution 10^-3).
Vortexez-la.
Puis, à l'aide de billes de verre stériles, déposez 100 µL de cet échantillon par boîte.

5.

Mettez à incuber à la température adéquate, durant le temps nécessaire.
Ces paramètres dépendront des bactéries que vous souhaitez mettre en évidence. Si par exemple vous souhaitez que toutes les bactéries se développent, il faudra incuber à 37°C pendant 24h.

6.

Une fois les boîtes de retour de l'incubateur, comptez les colonies qui se sont développées sur votre milieu, et cela pour toutes les boîtes. Le résultat sera donné en UFC (Unité Formant Colonie).
Pour être prise en compte pour les calculs à venir, une boîte doit comporter entre 30 et 300 UFC.

7.

Etant donné que vous avez réalisé 3 boîtes par dilution, faites la moyenne des résultats obtenus pour chaque dilution.
Par exemple, pour la dilution 10^-3, vous avez, pour vos 3 boîtes : 120 - 96 - 110.
La moyenne est donc de : 108.7 UFC.

8.

A partir de là, vous pouvez déterminer la concentration de votre échantillon à 10^-3.
En effet, étant donné que vous avez étalé 100 µL de solution sur vos boîtes de Pétri (cf. étape 4), la concentration bactérienne dans 1 mL, est donc 10 fois supérieure.
Elle est donc de 1087 UFC / mL.

9.

Puis, à partir de cette concentration pour l'échantillon à 10^-3, vous pouvez retrouver la concentration de l'échantillon pur, celui qui vous a servi à réaliser votre dilution en cascade.
Pour cela, il vous suffit de prendre en compte la dilution que vous avez réalisée, et donc de multiplier 1087 par 10^3.

10.

Vous obtenez donc pour l'échantillon pur :
1.08 * 10^6 UFC / mL.

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