Comment réaliser une dilution en cascade ?

 

par juju27 |

     

Une dilution en cascade consiste à passer d'un échantillon pur (10^0), à une dilution beaucoup plus faible, qui peut être de 10^-6 ou de 10^-8 selon vos besoins.
En général, une dilution en cascade en microbiologie a pour but un dénombrement des bactéries présentes. Le nombre de bactéries dans un échantillon pur étant trop important pour être compté, il convient donc de diluer les échantillons.
Voici comment réussir une dilution en cascade :

Quelles sont les fournitures nécessaires ?

  • un échantillon microbien
  • un bec Bensen
  • des tubes stériles
  • un portoir
  • de l'eau distillée ou du NaCl
  • une pipette automatique ou une pipette graduée
  • des cônes stériles
  • un vortex

Étapes de réalisation

1.

Avant tout, allumez le bec Bensen à l'aide d'une allumette, afin de travailler en conditions stériles.
Pour une meilleure efficacité, la flamme doit être bleue. Cela produira une zone stérile d'environ 20 centimètres autour de la flamme.
Vous devez impérativement manipuler dans cette zone afin d'éviter toute contamination.

2.

Munissez-vous de tubes stériles. Ces tubes peuvent être des Falcon, des Eppendorf ou des tubes à essai, en fonction de la quantité d'échantillon que vous désirez.
Le nombre de tubes dépendra du nombre de dilutions que vous désirez obtenir. Par exemple, si vous comptez aller jusqu'à une concentration de 10^-6, il vous faudra 6 tubes stériles.

3.

Disposez-les sur un portoir adéquat afin de pouvoir manipuler avec plus de facilité.
Annotez les tubes qui se trouvent face à vous, en fonction de la dilution qu'ils vont contenir (10^-1; 10^-2; 10^-3 ...).

4.

Ensuite, ajoutez dans chaque tube du NaCl ou de l'eau distillée.
La quantité à ajouter, dépendra de la contenance des tubes, et du volume d'échantillon que vous possédez.
Dans un souci de simplicité, nous choisirons ici l'exemple de tubes de 10 mL.
Etant donné qu'une dilution par 10 doit avoir lieu entre chaque tube, il faudra ajouter 9 mL d'eau ou de NaCl dans chaque tube.

5.

Puis, homogénéisez l'échantillon pur à l'aide d'un vortex, et ajoutez dans le 1er tube (celui annoté 10^-1), 1 mL de cette solution.
(Nous prélevons ici, 1 mL car nous avons des tubes de 10 mL.
En effet, si dans un tube nous avons, 1 mL d'échantillon et 9 mL d'eau ou de NaCl, nous avons bien une dilution par 10).

6.

Homogénéisez ce 1er tube, et prélevez 1 mL de ce tube 1, et transférez ce millilitre dans le 2nd tube, annoté 10^-2.

7.

Homogénéisez ce 2nd tube à l'aide du vortex, puis, prélevez 1 mL de ce 2nd tube, et transférez-le dans le 3e tube.

8.

Procédez de même jusqu'au dernier tube que vous avez annoté.
Ce dernier tube doit en toute logique contenir 10 mL, et doit donc être plus rempli que les tubes précédents, qui eux ne posséderont que 9 mL.

9.

Si vous possédez des tubes de 5 mL, vous devrez mettre 4.5 mL dans vos tubes, et vous introduirez donc 0.5 mL d'échantillon pur dans le tube 1.
Vous prélèverez alors 0.5 mL du tube 1 pour le transférer dans le tube 2, et ainsi de suite...
L'important est que la dilution par 10 soit respectée pour chaque tube.
Pour cela, vous devez avoir dans votre 1er tube, 9 fois plus d'eau (ou de NaCl) que de solution bactérienne.

Astuces et mises en garde

Mise(s) en garde :

Vous devez changer de cônes à chaque prélèvement !

Sur le même thème

jennifer568

Comment se produit une éclipse solaire ?

Dès qu'il se produit une éclipse solaire, nous sommes tous à nos fenêtres parés de nos lunettes mais savez vous de quel manière elles se produisent ?

superbetty-boop

Comment en savoir plus sur le beurre karité ?

Que connait-on finalement sur le beurre de karité ? Le karité, appelé wolof « l'arbre à beurre », pousse dans les savanes boisées, sur les pentes des collines ou sur les plateaux de toute l'Afrique de l'ouest. Cet arbre est particulièrement proté

Fabrice MVondo

Comment faire de la lumière avec du quartz ?

Le quartz est une pierre piézo-électrique qui peut produire une petite lumière si elle soumise à une pression physique ou un stress. Théoriquement, cela est causé par la capacité de la pierre à créer de l'électricité à partir de la séparation

Chercher un article sur Comment fait-on

Derniers articles Sciences exactes