Comment couler un milieu de culture solide ?

 

par juju27 |

     

Une milieu de culture est une préparation contenant les éléments nécessaires au développement des micro-organismes. Leurs compositions sont variables et dépendent des organismes que l'on cherche à obtenir (gram +, gram -, catalase - ...).
Ce milieu doit être coulé dans des boîtes de Pétri pour être par la suite ensemencées.
Voici comment procéder à ce coulage de milieu ...

Quelles sont les fournitures nécessaires ?

  • un bec bunsen
  • des boîtes de Pétri stériles
  • un milieu de culture

Étapes de réalisation

1.

Avant de commencer, allumez le bec bunsen présent sur la table, en faisant en sorte que la flamme soit bleue.
Ceci à pour but de rendre stérile votre environnement de travail. Lors de cette manipulation, vous devrez rester à proximité de la flamme, cette dernière ne stérilisant l'air que dans un faible rayon (environ 10 centimètres).

2.

Sortez les boîtes de Pétri de leur emballage, et placez-les à côté de la flamme.

3.

Inscrivez-y le type de milieu avec lequel vous allez remplir cette boîte, afin de ne pas la confondre avec un autre milieu qui ressemblerait à celui-ci.
Attention, n'inscrivez rien sur le couvercle ! Si celui-ci se renverse, vous ne serez plus capable de retrouver à quelle boîte appartient tel ou tel couvercle.

4.

Otez le couvercle de la boîte de Pétri, ainsi que la protection du milieu de culture, et remplissez la boîte avec ce dernier, jusqu'à un peu moins que la moitié de la boîte.
Veillez à ce que le milieu soit suffisamment refroidi avant de commencer à le couler dans les boîtes.

5.

Refermez immédiatement la boîte une fois celle-ci remplie, et passez à la suivante.

6.

Patientez pendant que le milieu se solidifie dans la boîte.

7.

Une fois solidifiée, vous pouvez retourner votre boîte.
Soyez bien sûr que le milieu est devenu solide avant de la retourner.

8.

Emportez les boîtes au frais (environ 4°C), ce qui empêchera toute prolifération en attendant l'ensemencement.

Astuces et mises en garde

Astuce(s) :

Si lorsque vous ressortez les boîtes du frigo, vous constatez de la buée sur le couvercle, vous pouvez les déposer sous la hotte pour les faire sécher.

Mise(s) en garde :

Pensez à vous attacher les cheveux lorsque vous travaillez près du bec bunsen ! On ne sait jamais ...

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